BioximiaForYou

Amilazė

Alfa-amilazė (diastazė, alfa-1,4-gliukan-4-gliukano hidrolazė) priklauso hidrolazių klasei, kuri katalizuoja polisacharidų, įskaitant krakmolą ir glikogeną, hidrolizę į dekstrinus ir paprastus di- ir monosacharidus (maltozę, gliukozę).

Amilazė didžiausiose koncentracijose yra kasos ir seilių liaukose - kasos ir seilių izofermentų pavidalu. Fiziologinėmis sąlygomis serumo amilazę sudaro 40% kasos amilazės ir 60% seilių amilazės. Naudojant specifinius inhibitorius arba atskiriant elektroforezę galima nustatyti plazmoje esančio fermento kilmę. Amilazę pašalina iš plazmos pro inkstus ir išsiskiria su šlapimu. Tai lemia didesnį informacijos turinį, nustatantį alfa-amilazės aktyvumą šlapime kaip tyrimą, kuriame vertinama kasos funkcinė būklė. Amilazės aktyvumo augimas yra ypač svarbus diagnozuojant kasos ligas.

Klinikinė ir diagnostinė vertė:

Alfa-amilazės ir šlapimo aktyvumas per dieną labai skiriasi.

Hiperamalasemija - amilazės aktyvumo padidėjimas kraujo serume.

Ø Ūminis pankreatitas - didžiausios vertės atsiranda per pirmas 6 - 12 valandų po ligos simptomų atsiradimo. Po šio laiko fermento aktyvumas mažėja, normalizuojasi per 2-5 dienas. Jei aktyvumas išlieka didesnis nei 5 dienas, tai rodo, kad padidėjo uždegimas.

Ø lėtinio pankreatito paūmėjimas

Ø dvylikapirštės žarnos opos perforacija

Ø Žarnyno obstrukcija

Ø Ūmus apendicitas

Ø Alkaloidai (morfinas, heroinas, kodeinas)

Ø apsinuodijimas metanoliu

Ø didelės etanolio dozės (alkoholikai)

Hipoamilemija - amilazės aktyvumo kraujo serume sumažėjimas (beveik neturi diagnostinės vertės).

Ø Kasos nekrozė

Ø miokardo infarktas

Hiperamalazurija - padidėjęs amilazės išsiskyrimas su šlapimu.

Ø Ūminis pankreatitas - per pirmas 24 uždegimo valandas pastebimas fermentų aktyvumo padidėjimas. Padidėjęs fermento išsiskyrimas į šlapimą išlieka 7–10 dienų, nepaisant to, kad amilazės aktyvumas kraujyje po 3-4 dienų yra normalus.

Ø Kasos vėžys

Ø dvylikapirštės žarnos opos perforacija

Ø Akmenų liga

Ø seilių liaukų ligos, parotitas, seilių kanalų akmenys

Hipoamilazė - amilazės išsiskyrimo šlapime sumažėjimas.

Ø Inkstų liga

Ø Kepenų liga

"Alfa-amilazės aktyvumo nustatymas biologiniuose skysčiuose taikant vienodą Karavey metodą"

Principas: veikiant alfa-amilazei, krakmolas hidrolizuojamas, kad susidarytų produktai, kurie nesuteikia spalvos reakcijos su jodu. Jodo ir krakmolo komplekso spalvos sumažėjimo intensyvumas per laiko vienetą yra proporcingas fermento aktyvumui.

Tirta medžiaga: šviežia serumas, šlapimas.

Komplekte yra:

Reagentas №1 - buferis

Reagentas Nr. 2 - koncentruotas substratas

Reagento Nr3 - koncentruotas jodo tirpalas

Reagentas Nr. 4 - kalio fluorido tirpalas

Reagentas Nr. 5 - druskos rūgštis

Reagentų paruošimas analizei atlikti:

Substrato tirpalas: maišykite reagentus Nr. 1 ir Nr. 2 santykiu 24: 1.

Jodo tirpalas: sumaišykite distiliuotą vandenį, reagentą Nr. 3 ir reagentą Nr. 4 santykiu 7: 1: 2.

Druskos rūgšties darbinis tirpalas: buteliuko Nr. 5 turinys praskiedžiamas 16 kartų distiliuotu vandeniu.

Nustatymo eiga:

Reagentas

Patyręs mėginys

Kontrolinis mėginys

„BioXplorer“

Amilazė

α-amilazė [a - (1,4) -glukan-4-gliukanohidrolazė, KF 3.2.1.1] yra fermentas, kuris hidrolizuoja krakmolo, glikogeno ir kitų gliukozės polimerų vidines 1,4-glikozidines jungtis. Žmonėms pagrindiniai α-amilazės šaltiniai yra kasa ir seilių liaukos. Daugybė izotopų, išskirtų iš biologinių skysčių ir žmogaus audinių, tikriausiai yra heterogeniški dviejų amilazės izofermentų grupių pokyčiai, kurių sintezę koduoja du Atu-1 geno lokiai, seilių (C) amilazės tipas ir Atu-2, kasos (P) fermento tipas, glaudžiai susijęs su 1 chromosoma. C ir P izofermentai neturi didelių skirtumų aminorūgščių sudėtyje. Dviejose izoformose buvo išskirta gelio filtracija ant Sephadex C-amilazės frakcijoje, iš kurių viena yra angliavandeniai. Angliavandenių turinčių izoformų molekulinė masė, 57 kDa, be angliavandenių - 55 kDa. C-izoamilazių pagrindinių izoformų izoelektriniai taškai nuo 5,5 iki 6,5. Izamilazės p-grupė turi mažesnę molekulinę masę (53 kDa) ir joje nėra angliavandenių. Šių baltymų izoelektriniai taškai yra nuo 5,7 iki 7,0.

Įtikinamieji įrodymai, kad P tipo amilazė susidaro tik kasoje, yra šio izofermento nebuvimas asmenims, kuriems yra visa pankreathectomy. Priešingai, a-amilazės C izofermentas gali būti sintezuojamas įvairiuose organuose ir audiniuose. Didelis C-amilazės aktyvumas yra fiksuotas kiaušintakių audiniuose ir kiaušidžių cista. Sveikų žmonių serume ar šlapime nenustatoma specifinė moterų lytinių organų audinių pagaminta izoizlazių grupė; izoamilazių pasiskirstymas vyrams ir moterims yra vienodas. C-grupei priklausantys izomerai taip pat randami žmogaus pieno ir žaizdos skysčiuose.

Amilazės aktyvumo serume klinikinė reikšmė.

Serumo α-amilazės aktyvumo nustatymas yra labiausiai paplitęs testas ūminiam pankreatitui nustatyti. Ūminio pankreatito atveju, po skausmingo išpuolio serumo fermentų aktyvumas serume padidėja 3–12 valandų, pasiekiamas maksimalus po 20–30 valandų, o per keturias dienas jis pasireiškia normaliu būdu. Α-amilazės (diastazės) aktyvumas šlapime padidėja 6–10 valandų po aktyvumo serume padidėjimo ir normalus, dažniausiai tris dienas po padidėjimo.

Dabar plačiai žinoma, kad bendro a-amilazės aktyvumo padidėjimas nėra specifinis pankreatitui ir kitoms kasos ligoms. Klinikiniai tyrimai parodė, kad α-amilazės aktyvumas didėja daugelyje ligų, tarp kurių yra žarnyno obstrukcija, tulžies takų ligos, apendicitas, parotitas ir negimdinis nėštumas. Α-amilazės nustatymo jautrumas ir specifiškumas ūminio pankreatito diagnostikoje didėja, kai pasikeičia normalių verčių ribos (diskriminacinis normos ir patologijos lygis yra 1,5–2 kartus didesnis už viršutines normos ribas). Šiuo atveju α-amilazės aktyvumo nustatymas yra labiausiai informatyvus pirmoji ūminio pankreatito išsivystymo diena. Kai kurių autorių teigimu, serumo α-amilazės aktyvumo nustatymas lėtiniu pankreatitu neturi diagnostinės vertės.

Žmonėms α-amilazė, kuri laisvai praeina per inkstų kūnų filtravimo barjerą, imituoja inkstų kanalėlių epitelio ląsteles taip pat, kaip ir kiti mažos molekulinės masės serumo baltymai. Amilazės aktyvumo serume padidėjimą gali sukelti fermentų eliminacija. Pavyzdys yra būklė, vadinama makroamilemija, kai fermentas yra susietas su serumo imunoglobulinais ir sudaro makromolekulinį kompleksą. Toks kompleksas nefiltruojamas į šlapimą ir negali būti pašalintas naudojant kitus mechanizmus, dėl kurių reikšmingas ir kartais pailgintas a-amilazės aktyvumas kraujo serume. Makroamilemija pasireiškia sveikiems žmonėms, kurių dažnis yra 1%, pacientams, sergantiems hiperamilemija, kurių dažnis yra 2,5%. Makroamilemiją galima diagnozuoti ultracentrifugavimo metodu, EF, gelio chromatografija, taip pat buvo pasiūlytas paprastas komplekso su polietilenglikoliu nusodinimas.

Serumo α-amilazės aktyvumas dažnai padidėja inkstų nepakankamumo atveju, tačiau nėra visiškai aišku, kas sukelia šį padidėjimą - padidėja fermento susidarymas arba sumažėja jo eliminacija. Tokiais atvejais gali būti pateikta papildoma informacija nustatant α-amilazės išsiskyrimo greitį arba apskaičiuojant fermentų klirensą.

Pasak daugelio autorių, jautriausias ir specifinis pankreatito diagnozės tyrimas yra P-izoenzimo a-amilazės aktyvumo lygis. Šis tyrimas yra ypač svarbus, jei normalus amilazės aktyvumas randamas pacientui, turinčiam numatomą pankreatito diagnozę. Sumažinus P-amilazės aktyvumą, gali būti diagnozuotas lėtinis pankreatitas. P-izoamilazės dalis bendroje α-amilazės veikloje yra žymiai didesnė šlapime nei serume, galbūt dėl ​​skirtingų izofermentų išsiskyrimo per inkstus. Nepaisant to, α-amilazės izofermentų aktyvumo nustatymo šlapime diagnostinė vertė yra mažesnė nei kraujo.

Eksperimentas - pagrindinis mokslo metodas
Tiek stebėjimas, tiek matavimas yra įtraukti į tokį sudėtingą pagrindinį mokslo metodą kaip eksperimentą. Skirtingai nuo stebėjimo, eksperimentas pasižymi tyrėjo įsikišimu tiriamųjų objektų padėtyje, aktyviai įtakojant dalyką.

Dirvožemis yra unikalus biosferos komponentas
XIX a. Pabaigoje. Didysis rusų gamtos mokslininkas V. Dokuchajevas, studijavęs Černozemą ir kitus Rusijos slėnio ir Kaukazo dirvožemius, nustatė, kad dirvožemis yra natūralūs kūnai, turintys išorinių savybių ir jėgų savybių.

Šlapimo analizė
Šlapimo analizė - tai cheminių ir fizinių bandymų serija, kurios rezultatai rodo mėginio specifinį sunkumą ir pH bei kraujo, gliukozės ir kitų komponentų buvimą ir lygį mėginyje. Kadangi pagrindiniai duomenys apie lėtinį inkstų nepakankamumą ir gauti.

Amilazė

α - amilazė (diastazė, 1,4 - a - D - gliukano hidrolazė, EC 3.2.1.1.) katalizuoja krakmolo, glikogeno ir su juo susijusių polisacharidų α - 1,4 - gliukozido jungčių hidrolizę į maltozę, dekstrinus ir kitus polimerus. Fermento molekulinė masė yra apie 48 000 D. Molekulėje yra kalcio atomas, kuris ne tik aktyvina fermentą, bet ir apsaugo jį nuo proteazių poveikio, o amilazės aktyvumas didėja chloro jonų poveikiu. Kraujo sudėtyje yra du izofermentai: kasos - P tipo ir seilių - S tipo, kurių kiekviena yra suskirstyta į kelias frakcijas. S tipo izofermentas paprastai yra 45–70% (vidutiniškai 57%), likusi dalis - P-tipo. Abu izofermentai turi beveik identiškas katalizines ir imunologines savybes, šiek tiek skiriasi elektroforetiniu judėjimu, bet yra gerai atskirti gelio filtravimu DEAE - Sephadex. Taip pat yra makroamilazė, kuri nėra išskiriama per inkstus, bet gali būti randama normaliame kraujo serume (apie 1% sveikų žmonių) ir patologijoje (2,5%).

Didelis amilazės aktyvumas pastebimas parotidoje ir kasoje. Tačiau jos aktyvumas, nors ir daug mažesnis, randamas didelėse ir plonosiose žarnose, skeleto raumenyse, kepenyse, inkstuose, plaučiuose, kiaušintakiuose, riebaliniame audinyje. Kraujo fermentas yra susijęs su plazmos baltymais ir suformuotais elementais. Fermentinis aktyvumas vyrams ir moterims yra vienodas ir nepriklauso nuo paimto maisto pobūdžio ir paros laiko.

Esami metodai, skirti tirti a-amilazės aktyvumą biologiniuose skysčiuose, skirstomi į dvi dideles grupes:

1. Sacharinimas (reduktometrinis), pagrįstas cukraus, susidariusio iš krakmolo, tyrimu mažinant gliukozės ir maltozės poveikį.

2. Amiloklastinė medžiaga, pagrįsta nešvaraus krakmolo likučio nustatymu:

• pagal reakcijos su jodu intensyvumo laipsnį. Šie metodai yra jautresni ir specifiškesni, tačiau jų tikslumas labai priklauso nuo krakmolo kokybės ir nustatymo sąlygų optimizavimo.
• krakmolo klampumo suspensija, neturi didelio tikslumo ir nėra naudojami dabar.

3. Chromogeninius substratus naudojantys metodai - pagrįsti substrato - dažų kompleksų, kurie α-amilazės veikloje suskaidomi ir sudaro vandenyje tirpių dažų, naudojimą.

4. Susietų fermentinių reakcijų metodai:

Krakmolas + H₂Apie maltozę + maltotriozę + dekstriną

Maltozė + N₂Apie 2 gliukozės

Gliukozė + ATP gliukozė - 6 - F + ATP

Gliukozė-6-F + NADF gliukonatas-6-F + NADFN

Fermento aktyvumą lemia NADPH kaupimosi greitis.

Du amiloklastiniai metodai buvo patvirtinti kaip vienodi: Karavey (su atspariu krakmolo substratu) ir Smith-Rohe.

Amilazės aktyvumo nustatymas dažant
„Lachema“ įdarbinimo įmonės substratas

Principas

α - amilazė katalizuoja netirpios spalvos krakmolo substrato hidrolizę, kad susidarytų mėlynas vandenyje tirpus dažiklis. Išleistų dažų kiekis yra proporcingas kataliziniam aktyvumo aktyvumui.

Alfa-amilazės aktyvumo nustatymas.

Alfa-amilazė (diastazė) yra fermentas, kuris atlieka polisacharidų hidrolizinį skilimą į dekstrinus, maltozę ir gliukozę. Galutiniai amilazės produktai nesuteikia spalvos reakcijos su jodu. Kasos ir seilių liaukos yra turtingiausios amilazėje. Amilazė išskiriama į kraują daugiausia iš šių organų.

Žmogaus kraujo plazmoje yra daugiausia dviejų tipų amilazė: kasos ir seilių, trečioji amilazės rūšis yra didelė arba makroamilazė. Naudojant šlapimą, kasos amilazė daugiausia išskiriama, o tai yra viena iš priežasčių, dėl kurių šlapimo amilazės nustatymas yra labiau informatyvus nei kraujo, siekiant įvertinti kasos funkcinę būklę. Manoma, kad 65% šlapimo amilazės aktyvumo atsiranda dėl kasos amilazės, o 60% amilolitinio aktyvumo serume gaunama seilių liaukų amilazėje. Ūminio pankreatito atveju kasos amilazė serume padidėja iki 89%, o šlapime - 92%, nekeičiant seilių amilazės rodiklių.

Amilazės aktyvumas kraujyje ir šlapime vyksta per visą dieną, taip pat pastebimi individualūs skirtumai. Amilazės aktyvumo svyravimai reikalauja atlikti tyrimą kasdieniame šlapime, siekiant įvertinti kasos funkciją.

Esami α-amilazės aktyvumo nustatymo metodai skirstomi į 2 grupes:

1. Galutinio taško metodas pagrįstas neapdirbto krakmolo likučio nustatymu pagal reakcijos su jodu intensyvumo laipsnį (Karavey metodas).

2. Kinetinis metodas.

serumo α-amilazė - 16-30 g / h * l

šlapimo α-amilazė - 28-160 g / h * l

1. Serumas neturėtų būti hemolizuojamas.

2. Eksperimento sąlygos yra labai svarbios, ypač tiksli 5 minučių inkubavimo trukmė, todėl nerekomenduojama atlikti daugiau kaip 5 serumų vienu metu.

3. α-amilazės aktyvumo šlapime nustatymas atliekamas panašiai kaip nustatymas kraujyje, tačiau hiperamilazės atveju rekomenduojama šlapimą atskiesti vėliau perskaičiuojant.

4. α-amilazės aktyvumą įtakoja vaistai - antibiotikai, skausmą malšinantys vaistai ir alkoholis.

Amilazės aktyvumo didėjimas, dažniausiai pasireiškia kasos ligose.

Ūminio pankreatito atveju fermento aktyvumas kraujyje ir šlapime padidėja daugiau nei 10 kartų. Hiperamalasemija atsiranda iš karto po ligos pradžios, pasiekia didžiausią 12-24 valandų laikotarpį, po to fermento aktyvumas greitai mažėja ir tampa normalus 2-6 dienas. Paprastai hipramilazurija trunka ilgiau nei fermento aktyvumo padidėjimas serume, todėl 2-3 dienas po skausmingo ataka yra labiau informatyvus nustatyti α-amilazės aktyvumą šlapime.

Lėtinio pankreatito, kasos vėžio atveju fermentų aktyvumo padidėjimas nėra toks didelis. Be to, gali būti šiek tiek padidėjęs fermentų aktyvumas ligose, kurias lydi panašus klinikinis vaizdas su ūminiu pankreatitu: ūminiu apendicitu, peritonitu, perforuota skrandžio opa ir pan.

Todėl ryški amilemija leidžia atskirti ūminį pankreatitą nuo lėtinių kasos ligų, taip pat nuo kitų ūminių pilvo ertmės ligų.

Beveik visada amyzemija yra susijusi su amilezurija. Tačiau šlapimo amilazės aktyvumo nustatymas yra ne toks tikslus diagnostinis rodiklis amilazės išsiskyrimas šlapime yra susijęs su inkstų funkcija. Nedidelis amilazės padidėjimas kraujyje, sumažinant jo kiekį šlapime, gali būti paaiškintas inkstų išskyrimo funkcijos pažeidimu.

Vartojant kasos nekrozę, kepenų ligomis (hepatitu, ciroze), dideliais nudegimais, cukriniu diabetu, cachexia ir pan.

194.48.155.252 © studopedia.ru nėra paskelbtų medžiagų autorius. Bet suteikia galimybę nemokamai naudotis. Ar yra autorių teisių pažeidimas? Rašykite mums | Atsiliepimai.

Išjungti adBlock!
ir atnaujinkite puslapį (F5)
labai reikalinga

Amilazės nustatymas biologiniuose skysčiuose

Amilazė kraujyje ir šio indikatoriaus lygis yra normalus

• Kas yra šis fermentas
• Nustatymo metodai
• Norma
• Padidinimo priežastys
• Sumažinti

Vienas iš svarbiausių biocheminės kraujo analizės komponentų yra jo fermentinio aktyvumo tyrimas. Tai lemia įvairių fermentų, kuriuos daugiausia gamina tam tikri organai, koncentraciją plazmoje. Toks specifiškumas leidžia juos naudoti kaip siaurų ligų diapazono diagnostinius kriterijus. Šiame straipsnyje aptarsime tokį rodiklį kaip amilazės greitį, nurodantį specifinius kasos patologijos žymenis.

Kas yra šis fermentas

Jau daugelį metų nesėkmingai kovoja su hipertenzija?

Instituto vadovas: „Būsite nustebinti, kaip lengva išgydyti hipertenziją vartojant kiekvieną dieną.

Alfa-amilazė laikoma viena iš kasos sulčių (kasos) fermentų, aktyviai dalyvaujančių virškinimo procese. Jis gaminamas eksokrininėmis ląstelėmis ir per ekskrecinius kanalus patenka į dvylikapirštę žarną, kur jis yra atsakingas už sudėtingų angliavandenių komponentų skaidymą į paprastesnius. Jie dalyvauja glikogeno ir krakmolo skaidyme. Galutinis jų veiksmų rezultatas turėtų būti paprasto gliukozės gamyba, kurią organizmas suvartoja ląstelių energijos poreikiams grąžinti.

Tačiau amilazė turėtų tekėti tik į žarnyno liumeną. Paprastai nedidelis jo kiekis patenka į sisteminę kraujotaką, nes kiekviena gyvybiškai svarbios veiklos ląstelė tiesiogiai liečiasi su krauju. Tol, kol nepažeidžia kasos ląstelių vientisumas, fermento koncentracija neviršija įprastų ribų. Kraujo amilazė dėl didelio fermentinio aktyvumo, turinčio įtakos kūno audiniams, gali sukelti jų sunaikinimą. Todėl jo kiekis turėtų būti išlaikytas pastoviu lygiu.

Hipertenzijos gydymui mūsų skaitytojai sėkmingai naudojasi „ReCardio“. Matydami šio įrankio populiarumą, mes nusprendėme suteikti jums jūsų dėmesį.
Skaitykite daugiau čia...

Kraujo amilazės aktyvumo nustatymo metodai ir tyrimai

Amilazė kraujyje cirkuliuoja tokiu būdu: fermentą išskiria liaukos kasos ląstelės, patenka į kraują ir yra vežami į visus indus. Kepenyse jis iš dalies neutralizuojamas. Ši fermento dalis, kuri neturi laiko žlugti, praeina per inkstų filtrą, kur jis koncentruojamas ir išsiskiria su šlapimu. Šis mechanizmas yra pagrindas nustatyti alfa-amilazės koncentraciją įvairiuose biologiniuose skysčiuose.

Pagrindinės analizės apima:

• Biocheminė analizė kraujo alfa-amilazei nustatyti;
• Biocheminė šlapimo amilazės nustatymo analizė (diastazės analizė).

Klinikinėje praktikoje dažnai naudojamas antrasis metodas, nes techniškai yra daug lengviau atlikti ir nereikalaujama paimti kraujo. Be to, jis yra jautresnis ir konkretesnis. Iš tiesų, esant stabiliam dideliam kraujo ir ekstraląstelinio skysčio kiekiui, fermentas yra labiau atskiestas nei mažame šlapimo kiekyje. Todėl šlapimo amilazės aktyvumas yra kelis kartus didesnis už kraujo plazmos aktyvumą.

Įprastas veikimas

Vertinant analizės rezultatus, jie turėtų būti lyginami su tam tikrais standartais. Svarbu manyti, kad norma reiškia tam tikrų matavimo vienetų vertinimą. Todėl būtinai atkreipkite dėmesį į tuos simbolius, kurie išvardyti po skaičiais analizės rezultatų stulpelyje. Be to, skirtingose ​​laboratorijose nustatyta amilazės norma gali skirtis dėl skirtingo jautrumo reagentų naudojimo. Paprastai rodiklis nurodomas laboratorijoje šalia rezultato.

Lentelėje paprastai pripažįstami standartiniai diastazės ir alfa-amilazės rodikliai.

Biochemijai, kuri lemia kraujo amilazės aktyvumą, būdinga tai, kad amilazės greitis moterims ir vyrams yra identiškas. Lytiniai hormonai neturi reikšmingo poveikio šiam fermentui.

Indikatoriaus didinimo priežastys ir mechanizmai

Teisingas analizės rezultatų, nustatančių amilazės koncentraciją plazmoje ar šlapime, aiškinimas gali padėti diagnozuoti daugelį ligų. Klinikinėje praktikoje dažniausiai pasitaiko situacijų, kai amilazė arba diastazė yra padidėjusi. Tai rodo, kas kilo:

• Padidėjęs kasos sekrecinis aktyvumas;
• Kliūčių buvimas kasos ortakiuose arba jų suspaudimas, kuris apsunkina kasos sulčių, turinčių amilazę, nutekėjimą;
• Kasos audinių įtaka yra trauminis, uždegiminis, nekrotinis (destrukcinis) arba neoplastinis procesas.

Todėl padidėjęs alfa-amilazės ir šlapimo diastazės kiekis reiškia specifinius tokių kasos ligų ir jos kanalų žymenis:

1. Lėtinio pankreatito paūmėjimas;
2. Su ūminiu pankreatitu, židinio kasos nekroze (liaukos audinių savęs sunaikinimas fermentais), peripancreatine infiltracija arba pradinėse sunkiosios kasos nekrozės stadijose;
3. Kasos vėžys. Amilazės greitis yra didesnis, kai auglys yra organo galvos ir kūno;
4. Įvairių choledocholithiasis cholelitiazės tipų (akmenų migracija į tulžies kanalus);
5. Dvylikapirštės žarnos dvylikapirštės žarnos nipelio pralaimėjimas stenozinio papilito, pleištinių akmenų ir vėžio auglių pavidalu.

Padidėjęs amilazės aktyvumas kitose ligose ir sąlygose

Kartais jūs turite susidurti su situacijomis, kuriose nėra jokių akivaizdžių kasos problemų, tačiau alfa-amilazės ir diastazės rodikliai viršija įprastą diapazoną. Tai reiškia, kad yra:

• Klaidos dietoje;
• Alkoholinių gėrimų naudojimas;
• Lėtinis cholecistitas ir uždegiminis procesas kepenyse;
• Negimdinis nėštumas;
• Pilvo organų uždegiminės-destrukcinės ligos (perforuota opa, apendicitas, peritonitas, žarnyno obstrukcija ir kt.);
• Virusinės infekcijos, lydimos poliglandulito (daugelio uždegiminių pokyčių beveik visose seilėse ir kasoje). Tai atsitinka su parotitu, citomegalia ir Epstein-Barr virusine infekcija.

Sumažinti

Retai reikalaujama iššifruoti testus, kurių rezultatai sumažino kraujo amilazės aktyvumą. Bet vis dėlto kartais turite susidurti su juo. Tai įmanoma su:

• Pilnas ar beveik visiškas kasos sunaikinimas dėl kasos nekrozės;
• Daugumos kasos vėžio transformacija, kurioje praktiškai nėra normalių ląstelių su išsaugotais funkciniais gebėjimais;
• Viso ar subtotalinio kasos rezekcijos pašalinimas;
• Genetiniai fermento aktyvumo sutrikimai organizme (cistinė fibrozė).

Amilazės lygis kraujyje ir šlapimo diastazėje yra patikimas pavyzdys, nurodantis kasos ligų diagnostikos kelio kryptį. Teisingas testų vertinimas kartu su kitų tyrimų rezultatų palyginimu palieka nemažai galimybių, kad daugelis ligų nepastebėtų.

Alfa-amilazės aktyvumo nustatymo klinikinė ir diagnostinė vertė

Kraujo ir šlapimo

Alfa-amilazės ir šlapimo aktyvumas per dieną (taip pat nuo vienos dienos į kitą) labai skiriasi. Be to, tiriamiesiems be virškinimo organų patologijos buvo pastebėti reikšmingi šių indikatorių skirtumai. Atsižvelgiant į alfa-amilazės išsiskyrimo su šlapimu svyravimus, rekomenduojama ištirti fermento aktyvumą per parą.

Alfa-amilazės aktyvumo kraujyje ir šlapime pokyčiai vyksta nėštumo metu. Hiperamalasemija. Alfa-amilazės aktyvumas žymiai padidėja kasos ligomis. Ūminio pankreatito atveju fermento aktyvumas kraujyje ir šlapime padidėja 10-40 kartų. Hiperamilemija pasireiškia ligos pradžioje, pasiekia maksimalią 12-24 valandų po išsivystymo, tada greitai mažėja ir pasiekia normą 2-6 dienas.

Fermento aktyvumas gali būti padidėjęs daugelyje ligų, kurios turi panašų klinikinį vaizdą su ūminiu pankreatitu, ty: ūminis apendicitas, peritonitas ir perforuota skrandžio ir dvylikapirštės žarnos opa. Pacientams, sergantiems peritonitu, amilazės aktyvumo padidėjimas yra amilazės formuojančių bakterijų vystymosi pasekmė. Paprastai fermentų aktyvumas šiose patologinėse sąlygose padidėja 3-5 kartus.

Ligos, kurios sukelia palyginti nedidelę ne kasos kilmės hiperamilemiją (t. Y., Tiesiogiai nesusiję su kasa), apima cholecistitą, cholelitiazę, būklę, susijusią su tulžies pūslės plyšimu, inkstų liga, inkstų nepakankamumu, vėžinio naviko metastazėmis plaučiuose ir seilių pažeidimus. su ortakių uždarymu (aiškus parotito klinikinis vaizdas leidžia lengvai paaiškinti hiperamilemiją), prostatitas, trauminis smegenų pažeidimas, trauminis šokas, nudegimai, pneumonija, diabetinė ketoacidozė, abortas, pooperacinis laikotarpis.

Alfa-amilazės aktyvumas serume taip pat didėja stemplės perforacijos, skrandžio opos, gastrito, ūminio žarnyno obstrukcijos, išemijos ir plonosios žarnos infarkto, peritonito, vamzdelio plyšimo negimdinio nėštumo metu, salpingito, aortos aneurizmos metu.

Pagrindinės hiperamilemijos priežastys: sutrikusi sekrecijos nutekėjimas iš liaukų (alfa-amilazės gamintojai), padidėjęs histohematogeninio barjero pralaidumas liaukose, audinių nekrozė, sutrikęs fermentų išsiskyrimas per inkstų filtrą.

Kai kurie kiti hormonai ir daugelis farmakologinių vaistų, daugiausia dėl Oddi sfinkterio mažinimo, sukelia adrenaliną: adrenaliną, histaminą, sekretiną, furosemidą, salicilatus, antikoaguliantus, morfiną, pantoponą, opiumą, kodeiną, tetracikliną ir alkoholį.

Nepaisant to, kad hiperamilemiją beveik visada lydi peramilazurija, šlapimo alfa-amilazės aktyvumo nustatymas ne visada gali būti tikslus diagnostinis indikatorius, nes amilazės išsiskyrimas į šlapimą yra susijęs su inkstų funkcija. Be to, inkstai išskiria tik 24% amilazės, kurią išskiria virškinimo liaukos iš kraujo.

Alfa-amilazės aktyvumo tyrimas kasdieniame šlapime yra patikimesnis biocheminis tyrimas, siekiant nustatyti kasos ligą, nei tyrimas, pagrįstas vienos jo dalies analize. Po kraujo alfa-amilazės aktyvumo po pankreatito atakos normalizuojasi, jis gali išlikti padidėjęs šlapime iki 7 dienų.

Koeficientas „kraujo alfa-amilazės aktyvumas / šlapimo alfa-amilazės aktyvumas“ yra inkstų filtro funkcinio naudingumo rodiklis.

Klinikinėje praktikoje hipoamilaminas yra retas. Jis stebimas pacientams, sergantiems kepenų ligomis (hepatitu, ciroze), piktybiniais navikais (ypač esant kepenų metastazėms), dideliems nudegimams, odai, diabetui, hipotiroidizmui, įprastiems valgymo sutrikimams, svorio kritimui, kacheksijai ir apsinuodijimui ( pvz., toksikozės atveju nėščioms moterims). Alfa-amilazės aktyvumo sumažėjimas dažniausiai rodo, kad nepakankama skrandžio liaukos eksokrininė funkcija. Citratų ir oksalatų įvedimas sumažina fermentų aktyvumą.

Bendrojo laktato dehidrogenazės aktyvumo nustatymas

Laktato dehidrogenazė (L-laktatas; NAD-oksidoreduktazė, EC 1.1.1.27) yra glikolitinis (citozolinis cinko turintis) fermentas (molekulinė masė 135 000 D), kuris grįžtamai katalizuoja L-laktato oksidaciją į piruvinės rūgštį. Būtina šios reakcijos dalyvė yra oksiduotas nikotino adenino dinukleotidas, naudojamas kaip fermento kofaktorius, kuris atlieka vandenilio akceptoriaus vaidmenį.

Reakciją, katalizuotą laktato dehidrogenazės, galima pavaizduoti taip:

SNSNONSOO "+ OVER + Laktato dehidrogenazė SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Fermentas žmonėms plačiai paplitęs. Pagal fermentų aktyvumo mažėjimo laipsnį organai ir audiniai gali būti išdėstyti tokia tvarka: inkstai, širdis, skeleto raumenys, kasa, blužnis, kepenys, plaučiai, kraujo serumas. Pastaruoju metu buvo nustatyti keli skirtingi baltymai (izofermentai), turintys katalizines šio fermento savybes. Izofermentų baltymų dalies struktūros pokyčiai lemia jų skirtingas fizikines ir chemines savybes (ypač skirtingą elektroforezinį judėjimą agare, krakmale, poliakrilamidu ir kituose geliuose).

Kraujo plazmoje (serume) buvo nustatyti penki laktato dehidrogeazos izofermentai - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5, kurie yra gelyje mažėjančia jų elektroforetinio judumo tvarka.

Kiekvienas iš izofermentų yra tetrameras, kurį sudaro H ir M subvienetai. Nustatyta, kad LDH1 frakcija daugiausia yra gaunama iš širdies, LDH5, audinio iš kepenų. LDH ląstelių citoplazmoje ir serume yra 5 izofermentai.

M subvienetas yra daugiausia audiniuose su anaerobiniu metabolizmu, o H subvienetas yra audiniuose, kuriuose vyrauja aerobiniai procesai. Elektroforezės metodas nešikliams padeda padalinti visus 5 LDH izofermentus, kurie sudaro tokį procentą sveikų žmonių kraujo serume: LDH; (14–26%), LDH ^ (29–39%), LDH (20–26%), LDH4 (8–16%), LDH (6–16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Laktato dehidrogenazė yra ne tik plazmoje, bet ir dideliais kiekiais raudonųjų kraujo kūnelių, todėl analizei naudojamas serumas turi būti šviežias, be hemolizės.

Viso LDH aktyvumo nustatymo metodai yra suskirstyti į dvi pagrindines grupes: 1) kinetika, pagrįsta Warbur-optiniu testu (optinis efektas, susijęs su NAD konversija į NAD • N, ir atvirkščiai) ir 2) metodai, kuriais nustatomas susidariusio produkto kiekis arba suvartotas substratas po fiksuoto inkubavimo laikotarpio (galutinio taško metodai).

Darbas Nr. 32 Kolorimetrinis dinitrofenilhidrazino metodas laktato dehidrogenazės aktyvumui kraujo serume nustatyti (pagal Sevel ir Tovarek)

Metodo principas. L-laktatas šarminėje terpėje, esant LDH serumui ir pridedant NAD, oksiduojamas į piruvatą. Pagal jo formavimo laipsnį ir vertinant pagal fermento aktyvumą.

Reagentai

1. 0,45 mol / l natrio pieno rūgšties tirpalas. 100 ml talpos matavimo kolboje įpilama 5 ml pieno rūgšties, kurios koncentracija yra 800 g / l, ir 10 ml pieno rūgšties, esant 400 g / l koncentracijai, ir neutralizuojama 2 N natrio hidroksido tirpalu iki silpnos šarminės reakcijos, kurios pH yra 7,5 (naudojant fenolftaleiną turėtų būti silpnas). rožinė spalva). Tūrio kiekis žymimas distiliuotu vandeniu.

2. 0,03 mol / l natrio pirofosfato tirpalo, pH 8,8. Į 500 ml talpos matavimo kolbą įpilama 6,69 g Na₂ R₂O₅ • N₂Maždaug 50 ml praskiesto vandens dietos, mišinys kruopščiai sumaišomas ir tirpalo pH nustatomas iki 8,8 1N HCl tirpalu. Kolbos turinio tūris nustatomas iki žymės distiliuotu vandeniu. Reagentas yra stabilus vieną mėnesį, kai laikomas šaldytuve.

3. Sprendimas NAD. 3 mg NAD (chemiškai gryno) ištirpinama 1 ml distiliuoto vandens (esant 0,6 mg vienam mėginiui). Reagentas yra stabilus 4 savaites, kai laikomas šaldytuve.

4. 2,4-dinitrofenilhidrazino tirpalas. 19,8 mg 2,4-dinitrofenilhidrazino ištirpinama nedideliame 1N druskos rūgšties tirpalo kiekyje, kaitinant mišinį vandens vonioje. Atvėsinus, tūris 1 N druskos rūgštimi nustatomas iki 1 ml. Kitą dieną reagentas filtruojamas. Tirpalas laikomas tamsaus stiklo inde, jį galima naudoti vienerius metus.

5. 0,4 n natrio hidroksido tirpalas.

6. 1 n druskos rūgšties tirpalas.

7. Standartinis tirpalo rūgšties natrio tirpalas. 11 mg kristalinio natrio piruvino rūgšties ištirpinama nedideliame distiliuoto vandens kiekyje, perkeliama į 100 ml matavimo kolbą ir tirpalo tūris pripilčiamas iki žymės distiliuotu vandeniu. 1 ml tirpalo yra 110 µg natrio piruvato, kuris atitinka 88 µg pirovino rūgšties. Darbinis standartinis tirpalas ruošiamas 10 kartų praskiedžiant distiliuotu vandeniu. 1 ml tirpalo, kuriame yra 8,8 μg pirovino rūgšties.

Nustatymo eiga. 0,1 ml serumo, praskiesto 1: 2, sumaišomas su 0,3 ml NAD tirpalo ir 5 minutes kaitinamas 37 ° C temperatūroje. Po to 0,8 ml fosforo rūgšties kaitinimo tirpalo ir 0,2 ml natrio pieno rūgšties tirpalo, anksčiau kaitinamo 37 ° C Mišinys inkubuojamas 37 ° C temperatūroje 15 minučių, po inkubavimo mėginys pripildomas 0,5 ml 2,4-dinitofenilhidrazino ir laikomas kambario temperatūroje 20 minučių. Tada įpilkite 5 ml natrio hidroksido tirpalo, sumaišykite mėgintuvėlio turinį ir po 10 minučių

Absorbcija matuojama 500–560 nm bangos ilgio diapazone, pavyzdžiui, PEC su žalios šviesos filtru kiuvetėje, kurios sluoksnio storis yra 10 mm. Įrašomas mėginio optinis tankis, atsižvelgiant į absorbcijos kontrolę.

Kontrolinis mėginys dedamas tokiu pat būdu, kaip ir eksperimentinis, tačiau po inkubavimo mišinys pridedamas 1: 2 praskiestas serumas. Apskaičiuokite fermento aktyvumą pagal kalibravimo grafiką. Laktato dehidrogenazės aktyvumas yra išreiškiamas pirovino rūgšties mmol, kuris susidaro 1 h serumo inkubuojant 1 val. 37 ° C temperatūroje.

Norėdami gauti duomenis, kad sukurtumėte kalibravimo grafiką, turite atlikti šiuos veiksmus. Iš darbinio etaloninio natrio piruvino rūgšties tirpalo paruošite keletą praskiedimų (2 lentelė). Tada į mėgintuvėlius įpilkite 0,5 ml 2,4-dinitrofenilhidrazino tirpalo. Toliau apdorokite standartinius mėginius taip pat, kaip ir patyrusius.

Įdedant kontrolinį mėginį, į mėgintuvėlį įpilkite 0,6 ml distiliuoto vandens, 0,8 ml pirofosfato tirpalo ir 0,5 ml 2,4-dinitrofenilhidrazino tirpalo. Po to mėginys yra traktuojamas panašiai.

Norint rasti laktato dehidrogenazės aktyvumo rodiklius „piruvino rūgšties 1 litrui serume 1 valandos inkubacijos 37 ° C temperatūroje“ matmenyje, standartiniame mėginyje esantis pirovino rūgšties μmol kiekis dauginamas iš koeficiento 120 arba pirovino rūgšties μg kiekio - 1,41.

Norint išreikšti fermento aktyvumą naujos dimensijos vienetais, galite taikyti kitą formulę:

Laktato dehidrogenazės aktyvumas mmol / (h • l) = C 120: 88,

kur C yra pirovino rūgšties μg kiekis mėginyje, 120 yra piruvino rūgšties μg perskaičiavimo koeficientas į mg, 88 yra rodiklis, perskaičiuojamas iš mg į mmol.

Sukuriant kalibravimo diagramą ant abscisės ašies, fermento aktyvumo vertės išreiškiamos matmenimis, mmol DCH • l) ir pateiktos paskutiniame 33 lentelės stulpelyje. Tiesios linijos santykis tarp pirovinės rūgšties koncentracijos ir optinio tankio yra nuo 0 iki 10 mmol / (h • l).

Amilazės aktyvumo nustatymo klinikinė ir diagnostinė vertė

Amilazė yra fermentas, kuris suskaido krakmolą ir glikogeną. kasos ir seilių liaukos yra turtingiausios. Amilazės kiekis serume yra susijęs su maisto vartojimu: dienos metu aktyvumas yra didesnis nei naktį.

Amilazės aktyvumas serume didėja (hiperamilemija) su:

Ūminis pankreatitas (10-30 kartų, normalus 6-7 dienas, jei aktyvumas išlieka ilgesnis nei 5 dienas, tai rodo lėtinio proceso vystymąsi);

Lėtinio pankreatito paūmėjimas;

Parotitas (seilių liaukų uždegimas);

Gali sukelti alkoholis, adrenalinas, vaistai.

Kai amilazės aktyvumas serume mažėja (hipoamilemija), kai:

Kepenų ligos (hepatitas, obstrukcinė gelta, cirozė);

Padidėjęs aktyvumas šlapime (hiperamazėje) stebimas, kai:

Ūminis pankreatitas (turi didesnę diagnostinę vertę nei apibrėžimas serume, nes jis trunka ilgiau nei 7 dienas);

Fermento aktyvumo šlapime sumažėjimas (hipoamilazė) stebimas, kai:

Atsakykite į klausimus:

Nurodykite lokalizacijos vietą, optimalų pH ir biologinę amilazės vertę.

Parašykite reakciją, kuri katalizuoja amilazę.

Kokios klasės amilazės?

* Kokios yra pagrindinės ligos, kurioms būdingas padidėjęs amilazės aktyvumas. Paaiškinkite priežastį.

* Papasakokite apie pankreatito priežastis, tipus, laboratorinę diagnozę ir prevenciją.

3.8. Praktinis darbas "Serumo aminotransferazės aktyvumo nustatymas".

Praktinio darbo tikslai:

ištirti aminotransferazių serumo klinikinę ir diagnostinę vertę;

išmokti nustatyti aminotransferazių aktyvumą serume.

Užduotys savarankiškam darbui:

Įrašykite nešiojamojoje knygoje praktinio darbo principą ir metodiką.

Įrengti darbo vietą praktiniam darbui.

Ar praktinis darbas.

Atlikite reikiamus skaičiavimus.

Užpildykite analizės formą. Įvertinkite rezultatus.

Padarykite išvadą apie darbą ir brėžinius.

Atsakykite į papildomus klausimus.

Transaminuojant, kuris vyksta veikiant AsAT ir AlAT, susidaro oksaloacetinės ir piruvinės rūgštys. Pridedant 2,4-dinitrofenilhidrazino tirpalo, fermentinis procesas sustoja ir atsiranda piruvinės rūgšties hidrazonai. Šarminėje terpėje jie suteikia dažymą, kurio intensyvumas yra proporcingas susidariusiai piruvinės rūgščiai.

1. Etaloninis tirpalas natrio piruvino rūgštis - 2 mmol / l.

2. 2,4 - dinitrofenilhidrazinas - 1 mmol / l.

3. Natrio hidroksidas - 0,4 n..

4. Pagrindas AsAT / AlAT.

2. FEC, kiuvetės per cm.

4. Bandymo vamzdelio stovas.

5. 1 ir 5 ml pipetės.

Atlikite aminotransferazių aktyvumo serume tyrimą pagal lentelę.

Serumo amilazės aktyvumo nustatymo diagnostinė vertė

Žmonėms alfa-amilazę išskiria kasos ir seilių liaukos, mažas jo aktyvumas yra kepenų audiniuose ir skeleto raumenyse. Alfa-amilazės molekulinė masė yra palyginti maža, skirtingai nei dauguma fermentų, ji filtruojama inkstų glomeruliuose ir yra šlapime. Alfa-amilazę sudaro du izofermentai: kasos tipo (P tipo) ir seilių (S tipo). Sveikiems žmonėms serumas sudaro apie 70% amilolizinio aktyvumo seilių izofermente, šlapime - apie tą patį procentą yra kasos izoamilazė.

Hiperamilasemija ir hiperamalazurija yra stebimos daugelyje ligų, tačiau jos yra ryškiausios esant ūminiam pankreatitui, kurio aktyvumas didėja (iki 90% ar daugiau) dėl kasos izofermento. Šios ligos metu didžiausias amilazės kiekis kraujyje ir šlapime buvo pastebėtas per pirmas 1-3 dienas. Virusinis hepatitas ir kasos vėžys taip pat sukelia kasos hiperamilazuriją kasoje.

Ne kasos hiperamilemija apima seilių liaukų pažeidimą, inkstų nepakankamumą. B-amilazės padidėjimo kraujyje priežastys yra sutrikusi liaukų, turinčių b-amilazę, sekrecija, nepakankamas amilazės išsiskyrimas iš organizmo.

Daugelis farmakologinių medžiagų, kortikosteroidų, salicilatų, tetraciklino, furosemido, histamino sukelia hiperamalemiją. B-amilazei kraujui būdingi plati vidiniai ir individualūs variantai. Labiausiai informatyvus yra kasos izoamilazės apibrėžimas.

Alfa-amilazės aktyvumo pokyčiai patologijoje.

Nustatant alfa-amilazės aktyvumą, diagnozuojama ir stebima kasos ligų, virškinimo sistemos, pilvo ertmės organų pažeidimų diagnostika ir stebėsena. Kai kuriais atvejais (pvz., Kasos ligų atveju) tik vieno izofermento, kasos alfa-amilazės, aktyvumas yra diagnostinis; stebint virškinamojo trakto ligas, būtina palyginti fermentų aktyvumą serume (sekrecinį aktyvumą ir papildomą absorbciją nuo pilvo ertmės) ir šlapimą (dažnai amilezurijos laipsnis yra stabilesnis ir ilgalaikis indikatorius nei amilemija).

Padidėjusios alfa-amilazės aktyvumo vertės stebimos:

Uždegiminės kasos ligos (ūminis, patinęs, lėtinis, reaktyvus pankreatitas). Hiperamilemija paprastai yra ūminė (10-40 kartų didesnė), tačiau dažnai trumpalaikė, taip pat reikšminga hiperamilazė, tačiau alfa-amilazės kiekis šlapime mažėja lėčiau nei kraujo plazmoje (serume). Ši savybė yra patogi naudoti, kai „vėlyvas“ diagnostinis paciento, sergančio klinikiniais pankreatito požymiais, tyrimas, tačiau siekiant stebėti proceso eigą, fermentų aktyvumas paprastai matuojamas abiejuose biologiniuose skysčiuose. Pažymėtina, kad sunkios kasos pažeidimų formos, turinčios audinių nekrozės pavojų, taip pat pankreatitas, lydimas rimtų lipidų apykaitos sutrikimų, gali lydėti realų arba klaidingą (dėl amilazės slopinimo triacilgliceridais) sumažėjusio fermento aktyvumo. Todėl, jei įtariama bet kokia pankreatito forma, diagnoziškai svarbu ne tik nustatyti alfa-amilazės aktyvumą šlapime ir serume, bet ir apskaičiuoti amilazo-kreatinino klirensą pagal formulę:

Ūminio pankreatito atveju apskaičiuota vertė viršija 6%. Skaičiuojant klirensą, negalite koreguoti šlapimo surinkimo apimties ir laiko, o rezultatas yra mažiau priklausomas nuo naudojamų nustatymo metodų.

Pilvo ertmės ligos, turinčios panašių simptomų su ūminiu pankreatitu: ūminis apendicitas, peritonitas, perforuota skrandžio opa ir dvylikapirštės žarnos opa. Alfa-amilazės aktyvumas padidėja maždaug 3-5 kartus, retai 10 kartų, o pagrindinė hiperememijos priežastis yra ne tiek padidėjęs fermento sekrecijos, tiek antrinis absorbavimas iš pilvo organų į kraują. Siekiant diferencijuoti diagnozę, atliekamas alfa-amilazės ir kreatinino kiekio nustatymas šlapime ir kreatinino klirenso apskaičiavimas naudojant pirmiau nurodytą formulę. Turint pastovią klirenso vertę nuo 1 iki 4%, turėtų būti įtariamos pilvo organų ligos, užsikrečiančios kaip ūminis pankreatitas.

Dėl tos pačios priežasties alfa-amilazės aktyvumas žymiai padidėja, kai stemplės perforacija, gastritas, ūminis žarnyno obstrukcija, išemija ir mažas žarnų infarktas, kiaušintakių plyšimas, salpingitas, aortos aneurizma.

Vidaus organų, tiesiogiai nesusijusių su virškinimo sistema, ligų atveju yra įmanoma vidutiniškai padidinti viso alfa-amilazės ir (arba) jo izofermentų aktyvumą. Tokios ligos yra cholecistitas, cholelitiazė, inkstų parenchimos pažeidimas ir šios organo uždegiminės ligos, inkstų nepakankamumas, prostatitas, diabetinė ketoacidozė, piktybinių navikų metastazės audiniuose ir organuose (ypač plaučiuose, kasoje, skersinėje žarnoje). Jei įtariamos pirmiau aprašytos patologijos, atliekama lyginamoji viso ir kasos alfa-amilazės analizė, nes izofermento ligos dažniausiai padidėja aprašytomis ligomis (kasos irkologinis pažeidimas ir skersinis dvitaškis padidina tiek P, tiek S izofermentų aktyvumą, kuris leidžia atskirti iš tų pačių organų uždegiminių ligų).

Ne kasos kilmės hiperamalasemija taip pat atsiranda seilių liaukų ligoms ir tam tikroms smegenų patologijoms. Šiuo atveju bendro alfa-amilazės aktyvumo padidėjimas taip pat atsiranda dėl padidėjusio seilių izofermento aktyvumo ir diferencijuojant diagnozę, reikia atlikti lygiagrečią viso ir kasos alfa-amilazės matavimą (esant normaliam P-amilazės aktyvumui, gali būti įtariama minėta patologija).

Be to, lyginamasis alfa-amilazės aktyvumo šlapime ir serume analizė yra vertingas diagnostinis parametras vertinant inkstų patologiją. Sergant inkstų filtravimu (nefroziniu sindromu, glomerulonefritu ir pan.), Alfa-amilazės aktyvumas šlapime yra smarkiai sumažėjęs, o kraujyje pastebima vidutinė arba reikšminga hiperamlaemija, todėl amilazės / šlapimo amilazės koeficientas yra vienas iš pagrindinių diagnostinių parametrų. su šia patologija.

Pooperacinės sąlygos (sisteminis uždegiminis atsakas į operaciją, ARDS vystymasis ir tt) taip pat gali sukelti vidutinio sunkumo hiperamilemiją.

Alfa-amilazės aktyvumo sumažėjimas paprastai būna susijęs su kasos funkcinio aktyvumo sumažėjimu, kurį sukelia organo parenchimos pažeidimas ir (arba) sumažėjęs eksokrininis reguliavimas, ir dažniausiai pasireiškia, kai:

Nekroziniai kasos pokyčiai, susiję su hemoraginiu pankreatitu ir visa kasos nekroze.

Su kepenų ligomis (hepatitu, ciroze). Piktybiniai navikai, ypač kepenų metastazėse.

Sunkus endokrininis disbalansas: hipotirozė, cukrinis diabetas, hiperlipemija (ypač su triacilgliceridų pertekliumi, dėl fermento aktyvaus centro slopinimo), turinti bendrą mitybos sutrikimą, kacheksiją ir nėščių moterų toksikozę.

Kai kuriais atvejais, naudojant aukščiau aprašytas patologijas, alfa-amilazės aktyvumas serume negali mažėti, bet lieka nepakitęs.

Pagrindiniai ryšiai diferencinės patologijos su panašiais simptomais diagnozėje.

Dažniausiai šie rodikliai yra:

Bendras alfa-amilazės / kasos komponentas. Naudojamas diferencinei uždegiminių ir piktybinių procesų diagnostikai pilvo organuose ir kituose audiniuose. Uždegiminiuose procesuose, kurie neturi įtakos kasai, pagrindinis visų alfa-amilazės aktyvumo šaltinis yra seilių fermentas, todėl santykis „viso amilazės / kasos izoforma“> 1. Piktybinės žalos pilvo organams atveju abiejų izofermentų indėlis yra maždaug toks pat, ir šis koeficientas yra maždaug toks pat, ir šis koeficientas yra maždaug toks pat, kaip šis. 8-2,4. Įtraukus kasą į uždegiminį procesą arba jame dalyvaujant naviko metastazėms, viso ir kasos amilazės aktyvumo santykis neviršija 1,5.

Bendras alfa-amilazės / kreatinino kiekis šlapime ir serume. Apskaičiuotas klirensas naudojamas (formulė pateikta 3 dalyje), leidžia diferencijuoti uždegiminį procesą kasoje (koeficientas viršija 6%) ir pilvo organus (1-4%).

Bendras alfa-amilazės / bendros šlapimo alfa-amilazės kiekis. Naudojamas vertinant inkstų filtro funkcinį aktyvumą. Nefroziniu sindromu ir glomerulonefritu koeficientas yra didesnis nei 2-2,5.

Bendras serumo alfa-amilazės / serumo trigliceridų kiekis. Santykis yra „atvirkštinis“, nes triacilgliceridų perteklius gali slopinti alfa-amilazės aktyvumą. Tai leidžia atskirti patologinį fermento gamybos sumažėjimą ir trukdymą hiperipmijai.

Bendras serumo alfa-amilazės / kasos lipazės kiekis. Biologinė ir diagnostinė koeficiento reikšmė yra panaši į ankstesnio santykio reikšmę, nes laisvų triacilgliceridų buvimas serume yra tiesiogiai susijęs su kasos lipazės aktyvumu. Ši dalis yra tiesioginė.

Alfa-amilazės aktyvumo pokyčiai sveikiems žmonėms. Trikdžiais narkotikais.

Alfa-amilazės aktyvumas sveikų žmonių kraujo plazmoje iš esmės priklauso nuo dietos pobūdžio ir maisto produktų, kurie vyrauja dietoje. Be to, šis parametras labai priklauso nuo medžiagų apykaitos procesų intensyvumo konkrečiame individe, taip pat nuo subjekto smegenų veiklos. Todėl fermento aktyvumas tame pačiame individe skirtingais laikais (netgi tą pačią dieną) gali skirtis nuo 25 iki 50% abiem kryptimis.

Sveikiems žmonėms hiperamilemiją gali sukelti emocinė būsena (stresas, padidėjusi psichinė veikla), alkoholio vartojimas (netgi vieną kartą), taip pat susijęs su daug baltymų turinčių ir angliavandenių bei cukraus išeikvotų dietų. Hipoamilemija atsiranda, kai gliukozės panaudojimas didėja, nevalgius, aktyviai naudojasi, taip pat ir žmonėms, sergantiems hiperlipidemija, net jei nėra klinikinių požymių.

Nėštumo laikotarpiu iki 19 savaičių alfa-amilazės aktyvumas mažėja, lyginant su norma, iki 33-34 nėštumo savaičių, aktyvumo lygis didėja, o 37-40 savaičių jis stabilizuojasi 10-20% didesniu lygiu nei sveikų nėščių moterų fermentų aktyvumas..

Alfa-amilazės ir jo kasos izofermento aktyvumą taip pat reikšmingai įtakoja daugelio įprastų vaistų, naudojamų praktiškai sveikiems žmonėms, vartojimas trumpalaikių infekcinių ir uždegiminių ligų atveju - pavyzdžiui, tetraciklino antibiotikai, furosemidas, kortikosteroidų priešuždegiminiai vaistai, salicilatai.

Be to, reikšmingas poveikis alfa-amilazės aktyvumui turi vaistų, dėl kurių sumažėja Oddi sfinkteris, įskaitant hormonus (adrenaliną, histaminą, sekretiną), narkotines medžiagas (morfiną, pantoponą, opiumą, kodeiną) ir kitus vaistus, kurie padidina fermento sekreciją ir slopinti sekrecijos nutekėjimą iš kasos.

Remiantis biofile.ru

Metodo principas: Maltotriozidas, susijęs su 2-chlor-p-nitrofenoliu, yra naudojamas kaip alfa-amilazės substratas. Veikiant a-amilazei, substratas hidrolizuojamas, kad išleistų spalvotas 2-chlor-p-nitrofenolis, maltotriozė ir gliukozė. Reakcija vyksta greitai ir nereikalauja koenzimų buvimo reakcijos mišinyje. Substrato hidrolizės greitis yra tiesiogiai proporcingas a-amilazės aktyvumui mėginyje ir yra matuojamas spektrofotometriniu bangos ilgiu 405 nm.

Substratas-CNF ————> CNF + gliukozė + maltotriozė

Metodo tiesiškumas: iki 1500 U / l.

a-amilazė ne hemolizuojamame serume 7 dienas palaikoma pastovi kambario temperatūroje (18-25 ° C), 2 mėnesius laikant 2-8 ° C temperatūroje.

1) spektrofotometras su temperatūros kontroliuojama kiuvetė, kurios bangos ilgis yra 405 nm, optinio kelio ilgis - 1 cm; reakcijos temperatūra 37 ° C;

3) Automatinės pipetės 25 μl ir 1000 μl;

Seilių skystis taip pat gali būti naudojamas kaip fermento šaltinis (seilė 100 kartų praskiedžiama distiliuotu vandeniu), tačiau normos diapazonas labai skiriasi.

6) Darbinis reagentas (substratas - 1,8 mmol / l MES-buferyje (pH 6,0 ± 0,1)).

Darbinis reagentas yra tinkamas naudoti, jei jo optinis tankis yra ne didesnis kaip 0,6 optinio tankio vienetų. esant bangos ilgiui 405 nm, nėra drumstumo.

Prieš analizę reagentai turi būti šildomi iki matavimo temperatūros (37 ° C).

Maišykite mėgintuvėlio turinį ir įjunkite chronometrą. Mėginio optinis tankis matuojamas 405 nm ilgio distiliuotam vandeniui tiksliai 1 minutę. Pakartokite matavimą 3 kartus 1 minutės intervalu. Apskaičiuokite optinio tankio pokytį per minutę ir tada apskaičiuokite vidutinį optinio tankio matavimą per minutę (Dop / min).

A-amilazės faktoriaus aktyvumo, apskaičiuoto pagal formulę: t

kur Dop / min yra vidutinis optinio tankio pokytis per minutę;

1025 - bendras tirpalo tūris kiuvetėje;

1000 yra konversijos koeficientas ml iki l;

12,9 - 2-chlor-p-nitrofenolio milimolinis absorbcijos koeficientas;

0,025 yra serumo tūris ml;

1.0 yra optinio kelio ilgis.

Keičiant išvardintus parametrus, faktorius turėtų būti perskaičiuotas. Jei a-amilazės aktyvumas viršija 1500 U / l (taškas, esantis už kalibravimo grafiko tiesiškumo), analizuojamas serumas turėtų būti atskiestas 1: 1 druskos tirpalu ir matavimas turėtų būti pakartotas, o skaičiavimo rezultatas turėtų būti padaugintas iš 2.

Klinikinė ir diagnostinė vertė: a-amilazė yra endohidrolazė ir žmogaus organizme yra keli izofermentai: fermentą išskiria seilių liaukos (S tipo), kasa (P tipo); mažas fermentų aktyvumas randamas kepenyse, skeleto raumenyse, ašaros skystyje, pieno liaukų ir įvairių navikų sekrecijoje.

A-amilazės aktyvumas serume žymiai padidėja dėl P-izofermento įvairiose kasos ligose (pankreatitas, abscesas, trauma, vėžys).

Su seilių liaukų sužalojimais (seilių liaukų vėžiu, endeminiu parotitu, makroamilemija) taip pat padidėja a-amilazės aktyvumas, bet S-izoenzimo sąskaita.

Abu amilazės izofermentai turi mažą molekulinę masę (45 000), todėl jie filtruojami inkstuose ir išsiskiria su šlapimu. Ūminio pankreatito šlapimo amilazės (diastazės) aktyvumo padidėjimas pasireiškia 6-10 valandų vėliau nei kraujo serume.

Remiantis biohimist.ru

Metodo principas. Alfa-amilazė katalizuoja netirpios spalvos krakmolo substrato hidrolizę, sudarydama mėlyną vandenyje tirpų dažų. Išleistų dažų kiekis yra proporcingas fermento aktyvumui.

Nustatymo eiga. Nustatant alfa-amilazės aktyvumą serume arba šlapime, paruošiami lygiagrečiai eksperimentiniai ir kontroliniai mėginiai ir analizuojami tokia seka:

Mėginiai sumaišomi, paliekami stovėti 15 minučių, centrifuguojami 3000 aps./min. 5 minutes. Tada eksperimentinio mėginio optinį tankį FEC kontrolei išmatuokite 590 nm bangos ilgiu kiuvetėse, kurių sluoksnio storis yra 5,0 mm.

Fermento aktyvumas randamas kalibravimo grafike.

Alfa-amilazės aktyvumo serume ir šlapime klinikinė ir diagnostinė reikšmė: žmonėms alfa-amilazę išskiria kasos ir seilių liaukos, jo mažas aktyvumas randamas kepenų audinyje ir skeleto raumenyse. Fermento molekulinė masė yra palyginti maža („48 000“), todėl ji filtruojama inkstų glomeruliuose ir yra šlapime.

Sveikiems žmonėms serumo fermentų aktyvumas yra nuo 140 iki 350 U / l, šlapime nuo 1000 iki 2000 U / l. Amilazės aktyvumas didėja daugiausia dėl kasos ligų (ūminio pankreatito). Seilių liaukų ligos ir lėtinės inkstų ligos padidina alfa-amilazės aktyvumą.

Darbas Nr. 5. Adrenalino poveikis gliukozei kraujyje.

Darbo eiga. Triušiams, nuo ribinės ausies venos ar žiurkės iš caudalinės venos, surenkama 0,1 ml kraujo ir gliukozės kiekis kraujyje nustatomas pagal o-toluidino metodą.

Tada gyvūnas šukuos ant šono, odą trina alkoholiu ir 0,1% adrenalino tirpalo po oda 0,1 ml / 1 kg svorio, o po 30 minučių vėl matuojamas gliukozės kiekis kraujyje.

Darbo numeris 6. Insulino poveikis gliukozės kiekiui kraujyje.

Darbo eiga. Nuo kito triušio, esančio nuo ausies kraštinės venos, arba iš žiurkės, gautos iš caudalinės venos, paimkite 0,1 ml kraujo ir nustatykite gliukozės kiekį kraujyje.

Gyvūnui išpjaukite kailius į šoną, gydykite jį alkoholiu ir švirkškite po oda 1,5 insulino dozę kilogramui svorio. Po valandos nustatykite gliukozės kiekį kraujyje. Sušvirkškite 5% gliukozės tirpalo gyvūną, kad būtų išvengta insulino šoko: triušis 10 ml, žiurkė - 1 ml.

Trečiojo ir ketvirtojo darbų rezultatai prie stalo ir išvados.

Remiantis medžiagomis www.ronl.ru

α - amilazė (diastazė, 1,4 - a - D - gliukano hidrolazė, EC 3.2.1.1.) katalizuoja krakmolo, glikogeno ir su juo susijusių polisacharidų α - 1,4 - gliukozido jungčių hidrolizę į maltozę, dekstrinus ir kitus polimerus. Fermento molekulinė masė yra apie 48 000 D. Molekulėje yra kalcio atomas, kuris ne tik aktyvina fermentą, bet ir apsaugo jį nuo proteazių poveikio, o amilazės aktyvumas didėja chloro jonų poveikiu. Kraujo sudėtyje yra du izofermentai: kasos - P tipo ir seilių - S tipo, kurių kiekviena yra suskirstyta į kelias frakcijas. S tipo izofermentas paprastai yra 45–70% (vidutiniškai 57%), likusi dalis - P-tipo. Abu izofermentai turi beveik identiškas katalizines ir imunologines savybes, šiek tiek skiriasi elektroforetiniu judėjimu, bet yra gerai atskirti gelio filtravimu DEAE - Sephadex. Taip pat yra makroamilazė, kuri nėra išskiriama per inkstus, bet gali būti randama normaliame kraujo serume (apie 1% sveikų žmonių) ir patologijoje (2,5%).

Didelis amilazės aktyvumas pastebimas parotidoje ir kasoje. Tačiau jos aktyvumas, nors ir daug mažesnis, randamas didelėse ir plonosiose žarnose, skeleto raumenyse, kepenyse, inkstuose, plaučiuose, kiaušintakiuose, riebaliniame audinyje. Kraujo fermentas yra susijęs su plazmos baltymais ir suformuotais elementais. Fermentinis aktyvumas vyrams ir moterims yra vienodas ir nepriklauso nuo paimto maisto pobūdžio ir paros laiko.

Esami metodai, skirti tirti a-amilazės aktyvumą biologiniuose skysčiuose, skirstomi į dvi dideles grupes:

1. Sacharinimas (reduktometrinis), pagrįstas cukraus, susidariusio iš krakmolo, tyrimu mažinant gliukozės ir maltozės poveikį.

2. Amiloklastinė medžiaga, pagrįsta nešvaraus krakmolo likučio nustatymu:

• pagal reakcijos su jodu intensyvumo laipsnį. Šie metodai yra jautresni ir specifiškesni, tačiau jų tikslumas labai priklauso nuo krakmolo kokybės ir nustatymo sąlygų optimizavimo.
• krakmolo klampumo suspensija, neturi didelio tikslumo ir nėra naudojami dabar.

3. Chromogeninius substratus naudojantys metodai - pagrįsti substrato - dažų kompleksų, kurie α-amilazės veikloje suskaidomi ir sudaro vandenyje tirpių dažų, naudojimą.

4. Susietų fermentinių reakcijų metodai:

Krakmolas + H₂Apie maltozę + maltotriozę + dekstriną

Maltozė + N₂Apie 2 gliukozės

Gliukozė + ATP gliukozė - 6 - F + ATP

Gliukozė-6-F + NADF gliukonatas-6-F + NADFN

Fermento aktyvumą lemia NADPH kaupimosi greitis.

Du amiloklastiniai metodai buvo patvirtinti kaip vienodi: Karavey (su atspariu krakmolo substratu) ir Smith-Rohe.

α - amilazė katalizuoja netirpios spalvos krakmolo substrato hidrolizę, kad susidarytų mėlynas vandenyje tirpus dažiklis. Išleistų dažų kiekis yra proporcingas kataliziniam aktyvumo aktyvumui.